Basisvoorwaarden voor celkweek
1. Geschikt celkweekmedium
Een geschikt celkweekmedium is een van de belangrijkste voorwaarden voor celgroei en proliferatie in vitro. Het kweekmedium biedt niet alleen celvoeding en basisstoffen om celgroei en proliferatie te bevorderen, maar biedt ook een leefomgeving voor de groei en reproductie van gekweekte cellen.
2. Serum van hoge kwaliteit
Momenteel vereisen de meeste synthetische media de toevoeging van serum. Serum is een van de belangrijkste componenten in celkweekmedium en bevat een verscheidenheid aan groeifactoren en andere voedingsstoffen die nodig zijn voor celgroei.
3. Constante celgroeitemperatuur
Om de krachtige groei van gekweekte cellen te behouden, moet er een constante en geschikte temperatuur zijn.
4. Geschikte gasomgeving
Gas is een van de noodzakelijke voorwaarden voor het overleven van zoogdiercellen en de benodigde gassen zijn voornamelijk zuurstof en koolstofdioxide.
5. Celkweektemperatuur
Om de krachtige groei van gekweekte cellen te behouden, moet er een constante en geschikte temperatuur zijn. Verschillende soorten cellen hebben verschillende vereisten voor kweektemperatuur. De standaardtemperatuur voor menselijke celkweek is 36,5 °C ± 0,5 °C. Afwijking van dit temperatuurbereik zal het normale metabolisme van cellen beïnvloeden en zelfs sterven.
6. Geschikte gasomgeving
Gas is een van de noodzakelijke voorwaarden voor het overleven van zoogdiercelkweek en de benodigde gassen zijn voornamelijk zuurstof en koolstofdioxide. Zuurstof neemt deel aan de tricarbonzuurcyclus, produceert energie voor celgroei en proliferatie en synthetiseert verschillende componenten die nodig zijn voor celgroei.
Veel voorkomende besmetting van celkweek
1. Bacteriële besmetting
Bacteriële besmetting komt het meest voor. Zodra de operatie enigszins onjuist is, zal dit celbesmetting veroorzaken. Na bacteriële besmetting zal het verschijnen als zwarte dunne stroken zand wanneer het onder de microscoop wordt waargenomen. Staafvormig, enz. Ten tweede wordt het kweekmedium geel en troebel, en fijne zandvormige sedimenten zijn duidelijk te zien in de petrischaal en er is van tijd tot tijd een vreemde geur.
2. Schimmelbesmetting
De met schimmels besmette kweekoplossing is duidelijk en transparant, niet zoals een grote uitbraak van bacteriële infecties, dus het is moeilijk om het vroeg te detecteren. Soms lijkt het op een filament onder de microscoop, soms lijkt het op een koraal en langzaam groeit er een heel dun zwart filament. Dit Wanneer het te laat is, is het moeilijk voor de cellen om gered te worden.
3. Schimmelbesmetting
In overeenstemming met schimmelinfecties, omdat het kweekmedium helder is, is schimmelbesmetting moeilijk vroeg te detecteren, wanneer het vaak te laat is. Flocculente onzuiverheden verschenen langzaam in het kweekmedium en filamenteuze massa zwevende objecten konden onder de microscoop worden gezien, zoals katjes in de wind. Cellen kunnen nog steeds groeien, maar na verloop van tijd verslechteren de cellen en stoppen ze met groeien.
4. Mycoplasma infectie
Het kweekmedium wordt troebel. Nadat mycoplasma de cellen infecteert, zijn de cytopathische veranderingen niet duidelijk, maar de celtoestand wordt slechter en de groei vertraagt. Er kunnen kleine zwarte vlekken onder de microscoop zijn, maar het kweekmedium is over het algemeen niet troebel. Nadat de cellen waren gepasseerd, verschenen intercellulaire zwarte vlekken, cellen werden gevacueerd en veel cellen leken op apoptose en necrose. Uiteindelijk dreven de cellen en stierven ze volledig.
Preventie van celbesmetting
Het vaststellen van goede regels en voorschriften kan een lange weg gaan in het verminderen van celbesmetting. Inclusief toegangssysteem, besturingssysteem en dagelijks beheersysteem.
Toegangssysteem: inclusief personeel en materialen. Personeel moet worden opgeleid voordat ze zelf kunnen werken en ze moeten voldoen aan de draagvereisten voordat ze het laboratorium betreden, zoals witte jassen, isolatiejassen, maskers, handschoenen, enz. Voor de benodigde artikelen moeten niet-wegwerpartikelen strikt worden gesteriliseerd en gesteriliseerd en gekochte artikelen moeten worden gekocht via reguliere en betrouwbare kanalen. Nieuw gekochte cellen moeten vóór gebruik worden getest en geverifieerd.
Operationele specificaties: Het is het beste om specificaties voor routinematige operaties te formuleren en laboratoriumpersoneel moet de bedrijfsspecificaties volgen, die niet naar believen kunnen worden gewijzigd, en ook goede werkgewoonten voor laboratoriumpersoneel cultiveren. Nadat de pipetpunt bijvoorbeeld is gezogen, wordt deze niet voor een tweede keer in het medium uitgeschoven en wordt er eenmaal voldoende medium gezogen. Bij het toevoegen van vloeistof moet de vloeistof zoveel mogelijk in suspensie worden toegevoegd, wat mycoplasmabesmetting en celkruisbesmetting effectief kan voorkomen. Bovendien, indien mogelijk, gebruik slechts één cellijn tegelijk, en het is beter om een klein tijdsinterval tussen cellen te hebben om kruisbesmetting te voorkomen.
Dagelijks beheersysteem: Het omvat regels en methoden voor het gebruik, de reiniging en het onderhoud van het milieu en verbruiksartikelen, reagentia, enz. Er zijn ook beheer van het verbruik, de inventaris en de inkoop van reagentia en verbruiksartikelen, inclusief voorraadbeheer op twee niveaus van celmonsters. Voor de besmettingsbronnen die niet gemakkelijk te vinden zijn, is het het beste om regelmatig tests uit te voeren, voornamelijk mycoplasmabesmetting en celkruisbesmetting.
BKMAM Bio levert overeenkomstige verbruiksartikelen voor celkweek:
Wegwerp plastic ronde/vierkante petrischaaltjes:
Hoge transparantie polystyreen materiaal (PS);
Het oppervlak is glad en vlak en er is geen optische vervorming van cellen onder microscoopobservatie;
Stapelontwerp maakt stapelen en opslag eenvoudiger;
Ethyleenoxide sterilisatie (EO);
Slijtvastheid en corrosiebestendigheid.
Adherente behandeling van celkweekschalen:
Polystyreen materiaal (PS);
Elektronenbundelsterilisatie, geen pyrogeen, geen toxine;
Vacuüm plasma oppervlaktebehandeling, uitstekende celhechting;
Het oppervlak is glad en vlak en er is geen optische vervorming van cellen onder microscoopobservatie;
Stapelbaar ontwerp maakt stapelen en opslaan eenvoudiger.
Plastic celkweekplaten:
Polystyreen materiaal (PS);
Geschikt voor normale celkweek, niet-aanhankelijk behandelingsplaattype;
Geen pyrogeen, geen toxine, gesteriliseerd;
Eenvoudige scheurtype onafhankelijke verpakking, eenvoudig te bedienen;
Adherente behandeling van celkweekplaten:
Polystyreen materiaal (PS);
Adherent behandeling (TC behandeling) plaattype, geschikt voor het kweken van adherente cellen;
Geen pyrogeen, geen toxine, gesteriliseerd;
Eenvoudige scheurtype onafhankelijke verpakking, eenvoudig te bedienen;
Het zijn allemaal platte bodems.
Adherente behandeling van celkweekkolven:
Polystyreen materiaal (PS);
Elektronenbundelsterilisatie, geen pyrogeen, geen toxine;
Vacuüm plasma oppervlaktebehandeling, uitstekende celhechting;
Ademende afdekking, die bevorderlijk is voor gasuitwisseling en voorkomt dat micro-organismen doorkomen.
Interne/externe spin cryovialen:
100% zuiver polypropyleen materiaal (PP);
Bestand tegen 15psi, 121 °C sterilisatie;
De buiswand is verdikt en het buislichaam heeft schaal en schrijfgebied;
Er is een siliconen ringafdichting tussen de pijpdekseldraad en het pijplichaam om dichtheid te garanderen;
Geen DNase, geen RNase, geen pyrogeen, geen endotoxine.
